蛋白純化色譜柱供應(yīng) 多肽色譜柱
色譜柱的清潔與再生
VYDAC®蛋白質(zhì)/肽反相色譜柱可能會(huì)因?yàn)楸晃�附能力�?qiáng)的樣品成分污染而導(dǎo)致柱性能下降。如
果前面所給的建議方法不能解決問(wèn)題，那么試試如下方法：
1. 注射1％SDS溶液最多達(dá)該色譜柱體積的12％（對(duì)于4.6mm×250mm規(guī)格色譜柱約為500µL）。然后用含有0.1％（v/v）TFA的5％到95％的乙腈進(jìn)行20分鐘的梯度洗脫。
2. 如果是脂類(lèi)物質(zhì)或疏水性極強(qiáng)的小分子物質(zhì)導(dǎo)致了柱性能的變化，我們建議您用數(shù)倍于柱
體積的溶劑按如下順序沖洗該色譜柱：乙腈（10個(gè)柱體積），二***烷（10個(gè)柱體積），正己烷（10
個(gè)柱體積），二***烷（10個(gè)柱體積），乙腈（10個(gè)柱體積）
 3. 如果色譜柱性能的損失源于蛋白質(zhì)吸附，對(duì)于任何聚合式鍵合相我們建議可使用0.1N硝酸/異丙醇
（1：4）的混合液來(lái)沖洗該色譜柱。低流速（普通流速的20％）的隔夜沖洗是最有效的。
注意：硝酸清洗  不建議用于238TP, 238MS和238EV的“單點(diǎn)式、單點(diǎn)式""鍵合鍵合反相色譜、反相色譜柱。
 4. 使用6M的***胍水溶液。先過(guò)濾胍溶液，然后與異丙醇1:1混合。注射5％柱體積（對(duì)于一個(gè)4.6×250mm的分析柱，注射200µL），然后運(yùn)行異丙醇:水 1:1沖洗該柱。這樣能夠得到一個(gè)胍溶液組成的“塞流"，能夠打碎松脫柱內(nèi)牢固附著的蛋白質(zhì)物污染物。
 5. 合成肽：從固相樹(shù)脂上裂解下合成肽會(huì)產(chǎn)生具有高反應(yīng)活性的碳正離子而需要用苯甲醚和
茴香硫醚來(lái)“打掃"清除。而這些清除正碳離子的反應(yīng)產(chǎn)生大量的、可溶于有機(jī)溶劑的
芳香性化合物分子出現(xiàn)在“打掃"溶液中。用100％乙腈或者100％甲醇清洗色譜柱可能
無(wú)法將這些分子清洗干凈。又或者，有時(shí)，用這些有機(jī)溶劑清洗色譜柱可以除去一些這樣
的污染物，但是會(huì)產(chǎn)生蠟狀沉淀物，有時(shí)會(huì)被誤認(rèn)為柱內(nèi)的C18鍵合相流失。要進(jìn)行清除：用異丙醇
0-100%進(jìn)行梯度清洗大于10倍柱體積，在100％異丙醇處持續(xù)沖洗或直至基線(xiàn)平衡。在260nm
下檢測(cè)。用100％二***烷沖洗至基線(xiàn)平衡。在使用前用異丙醇除去
二***烷。這個(gè)方法在用于除去化學(xué)合成所引入的污染物方面效果顯著。
反相色譜分離肽或蛋白時(shí)，應(yīng)參考被分析或被純化目標(biāo)的疏水性大小及分子量大小來(lái)選擇合適的鍵和相。
Vydac® TP鍵和相規(guī)格
鍵和相 填料基質(zhì) 填料形狀 填料粒徑 孔徑 表面積 碳載量 鍵和類(lèi)型 封尾？ USP代碼
101TP Sil 硅膠 類(lèi)球形 5, 10, 10-15, 15-20μm 300? 70-100m2/g － 未鍵和 － L3
201TP C18 硅膠 類(lèi)球形 5, 7, 10, 10-15, 15-20μm 300? 70-90m2/g 8% 聚合式 無(wú) L1
202TP C18 硅膠 類(lèi)球形 3, 5, 10μm 300? 60-90m2/g 9% 聚合式 無(wú) L1
208TP C8 硅膠 類(lèi)球形 3, 5, 7, 10, 10-15, 15-20μm 300? 60-110m2/g 5% 聚合式 是 L7
214TP C4 硅膠 類(lèi)球形 3, 5, 7, 10, 10-15, 15-20μm 300? 60-110m2/g 3% 聚合式 是 L26
218TP C18 硅膠 類(lèi)球形 3, 5, 7, 10, 10-15, 15-20μm 300? 60-110m2/g 8% 聚合式 是 L1

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