蔬菜和水果中的氨基甲酸酯類農(nóng)殘檢測(cè)                  ——帶柱后衍生的高效液相色譜法     氨基甲酸酯類由于高效、經(jīng)濟(jì)而被廣泛應(yīng)用于蔬菜水果種植過程，但會(huì)對(duì)生態(tài)環(huán)境造成嚴(yán)重污染，并引發(fā)中毒。該類農(nóng)殘檢測(cè)方法主要有液相色譜法、光譜法、氣質(zhì)聯(lián)用等，其中柱后衍生的高效液相法方法簡(jiǎn)單，檢測(cè)限低，已被農(nóng)業(yè)部列為該類農(nóng)殘的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法，但是由于進(jìn)口儀器價(jià)格昂貴，因此一直沒有得到大力推廣，本文利用泰特儀器的國產(chǎn)的設(shè)備得到的結(jié)果，完全可以滿足農(nóng)業(yè)部相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求。   【摘要】柱后衍生法是檢測(cè)氨基甲酸酯類在蔬菜水果中殘留量的重要方法。本文應(yīng)用高效液相色譜-柱后衍生系統(tǒng)對(duì)氨基甲酸酯類農(nóng)殘的檢測(cè)進(jìn)行了系統(tǒng)研究。通過微調(diào)NY/T 761-2008中的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法，建立了重現(xiàn)性良好、快速便捷、結(jié)果可靠的氨基甲酸酯類農(nóng)殘柱后衍生檢測(cè)方法。   【關(guān)鍵詞】氨基甲酸酯；殘留；泰特儀器柱后衍生；高效液相色譜   1．原理 樣品中的氨基甲酸酯類及其代謝產(chǎn)物用乙腈提取，提取液經(jīng)過濾、濃縮后，采用固相萃取技術(shù)進(jìn)行分離、凈化，淋洗液經(jīng)濃縮后，使用帶有熒光檢測(cè)器和柱后衍生系統(tǒng)的液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)。 2．試劑與材料  試劑：乙腈（色譜純）、甲醇（色譜純）、氯化鈉（分析純）、鄰苯二甲醛（OPA, Pickering）、0.05mol/L NaOH溶液（Pickering）、OPA稀釋液（Pickering）、巰基乙醇（Thiofluor，Pickering）、標(biāo)準(zhǔn)品（見表1） 表1  10種氨基甲酸酯類及其代謝產(chǎn)物標(biāo)準(zhǔn)品 序號(hào) 中文名 英文名 濃度μg/ml 溶劑 1 涕滅威亞砜 Aldicarb sulfoxide 1000 甲醇 2 涕滅威砜 Aldicadb sulfone 1000 甲醇 3 滅多威 Methomyl 1000 甲醇 4 3-羥基克百威 3-hydroxycabofuran 1000 甲醇 5 涕滅威 Adicarb 1000 甲醇 6 速滅威 Metolcarb 1000 甲醇 7 克百威 Carbofuran 1000 甲醇 8 甲萘威 Carbaryl 1000 甲醇 9 異丙威 Isoprocarb 1000 甲醇 10 仲丁威 fenobucarb 1000 甲醇         材料：新鮮黃瓜       固相萃取柱（氨基柱，Aminopropyl，容積6mL，填充物500mg）       濾膜：0.45μm有機(jī)濾膜 3．儀器設(shè)備 液相色譜儀：分析兩元高壓系統(tǒng)——二級(jí)柱后衍生系統(tǒng)——熒光檢測(cè)器 榨汁機(jī)、勻漿機(jī)、氮吹儀、固相萃取儀 4．樣品配制與檢測(cè) 4.1 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 將表1中的10種氨基甲酸酯類及其代謝產(chǎn)物標(biāo)準(zhǔn)品取各1mL混合置入容量瓶中，混勻后，取出一定量混合液，稀釋200倍，待測(cè)。 4.2 樣品的制備與凈化 4.2.1 試樣制備 按GB/T 8855抽取蔬菜樣品，取可食部分，將其切碎，充分混勻，放入榨汁機(jī)中，制成待試樣品，裝于容器中待用。 4.2.2 提取 稱取25g試樣，放入勻漿機(jī)中，加入50.0mL乙腈，在勻漿機(jī)上高速勻漿2min后，用濾紙過濾，濾液收集到裝有7g氯化鈉的100mL具塞量筒中，收集40ml，蓋上塞子，劇烈震蕩1min，在室溫下靜置30min，使乙腈相和水相分層。 4.2.3 凈化 參見農(nóng)業(yè)部標(biāo)準(zhǔn)NY/T 761-2008[1] 4.3 色譜條件 4.3.1 色譜柱：CXTH C18-5μm-100   4.6×250mm 4.3.2 柱溫：42℃ 4.3.3 檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng)330nm，發(fā)射波長(zhǎng)465nm 4.3.4 梯度程序： 梯度程序如表2所示：   表2 梯度程序  時(shí)間/min  流速/mL/min 甲醇%   水%  0.00  0.8  15  85  2.00  0.8  25  75  8.00  0.8  25  75  9.00  0.8  40  60  10.00  0.8  45  55  19.00  0.8  80  20  25.00  0.8  80  20  26.00  0.8  15  85   4.3.5 柱后衍生： 0.05mol/L溶液，流速0.3mL/min，水解溫度100℃ OPA試劑，流速0.3mL/min，水解溫度40℃ 4.4 樣品的色譜分析 分別吸取5.00μL標(biāo)準(zhǔn)混合溶液和凈化后的樣品溶液注入液相色譜儀中，以保留時(shí)間定性，以樣品溶液峰面積與標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積比例定量。 5. 結(jié)果 5.1 結(jié)果計(jì)算 試樣中被測(cè)殘留量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計(jì)，單位以mg/kg表示，按以下公式進(jìn)行計(jì)算：     式中：ρ ——標(biāo)準(zhǔn)溶液中的質(zhì)量濃度，單位為mg/L           A ——樣品溶液中被測(cè)的峰面積           As——標(biāo)準(zhǔn)液中被測(cè)的峰面積           V1——提取溶劑總體積           V2——吸取出用于檢測(cè)的提取液的體積，單位為mL            V3——樣品溶液定容體積，單位為mL           m ——試樣的質(zhì)量，單位為g 計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字，當(dāng)結(jié)果大于1mg/kg時(shí)保留三位有效數(shù)字。 5.2 結(jié)果與譜圖 5.2.1 氨基甲酸酯類標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣結(jié)果 圖1 氨基甲酸酯類標(biāo)準(zhǔn)溶液      1-涕滅威亞砜；2-涕滅威砜；3-滅多威；4-三羥基克百威；5-涕滅威；6-速滅威；              7-克百威；8-甲萘威；9-異丁威；10-仲丁威 圖1為氨基甲酸酯類標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣結(jié)果，從圖中可以看出十種標(biāo)準(zhǔn)品峰型完好，并且都能夠達(dá)到基線分離。其各樣品峰的保留時(shí)間如表3所示。 表3標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣結(jié)果 保留時(shí)間 名稱 保留時(shí)間 名稱 9.810 涕滅威亞砜 21.580 速滅威 11.290 涕滅威砜 22.373 克百威 14.203 滅多威 23.063 甲萘威 18.218 3-羥基克百威 24.348 異丁威 20.813 涕滅威 25.868 仲丁威   5.2.2 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 圖2  氨基甲酸酯類標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)性實(shí)驗(yàn)譜圖 圖2是進(jìn)樣三針后的譜圖重疊結(jié)果,從圖中可以看出譜圖重疊良好，說明此儀器和方法的重復(fù)性良好。   5.2.3 最低檢測(cè)限實(shí)驗(yàn) 取氨基甲酸酯類標(biāo)準(zhǔn)溶液，將其稀釋至0.01ppm，進(jìn)樣后的結(jié)果如圖3所示。從圖中可以看出0.01ppm的樣品具有很好的響應(yīng)，此儀器和方法完全適用于低濃度樣品的檢測(cè)。 圖3  氨基甲酸酯類標(biāo)準(zhǔn)溶液檢測(cè)限實(shí)驗(yàn)譜圖   5.2.4 黃瓜中氨基甲酸酯類殘留實(shí)驗(yàn) 將黃瓜樣品處理、凈化完畢并定容的樣品進(jìn)樣5μL，結(jié)果如圖4所示。經(jīng)分析可知其黃瓜中含有滅多威，經(jīng)計(jì)算可知黃瓜樣品中滅多威的含量為0.33mg/kg，低于國標(biāo)規(guī)定的蔬菜類最大檢測(cè)濃度。 圖4黃瓜中氨基甲酸酯類農(nóng)殘檢測(cè)譜圖   6 結(jié)論         本文采用泰特儀器柱后衍生系統(tǒng)對(duì)氨基甲酸酯類農(nóng)殘的檢測(cè)進(jìn)行了研究，將原標(biāo)準(zhǔn)中的進(jìn)樣量20uL調(diào)整為5uL，避免了溶劑效應(yīng)的產(chǎn)生，使得前三個(gè)峰的峰形更加對(duì)稱，重現(xiàn)性更好。同時(shí)將梯度中的流動(dòng)相流速變化取消，統(tǒng)一采用0.8mL/min的速度，使得基線更加平整，有利于痕量檢測(cè)。因此泰特儀器柱后衍生系統(tǒng)非常適合蔬菜水果中氨基甲酸酯類農(nóng)殘的檢測(cè)，操作簡(jiǎn)便，重現(xiàn)性好，測(cè)定結(jié)果可靠。   參考文獻(xiàn)： [1]NY/T 761-2008 蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類多殘留的測(cè)定