一種 蔬菜中噻蟲嗪農(nóng)藥殘留LC/MS/MS測(cè)定新方法
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作者：鄭曉敏
噻蟲嗪是新一代高效、低毒、廣譜型煙堿類殺蟲劑，具有良好的胃毒、觸殺活性。目前，噻蟲嗪的檢測(cè)分析方法主要有高效液相色譜法( HPLC) [1-6]、液相色譜一質(zhì)譜法( LC-MS)[7-10]、氣相色譜一質(zhì)譜法(GC—MS)[11]。這些檢測(cè)方法存在前處理復(fù)雜、回收率偏低或者靈敏度較低等缺點(diǎn)，因此，建立了一種高效、實(shí)用的針對(duì)蔬菜中噻蟲嗪的快速、靈敏的檢測(cè)方法，對(duì)全面加強(qiáng)蔬菜中的噻蟲嗪農(nóng)藥污染監(jiān)測(cè)和監(jiān)管，保證蔬菜產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展具有重要意義。
農(nóng)藥殘留的提取方法除了傳統(tǒng)的萃取技術(shù)，還有震蕩提取，分散固體萃取等新發(fā)展的提取技術(shù)；凈化方法多采用固相萃取柱進(jìn)行凈化。同時(shí)以分散固相萃取為基礎(chǔ)的QuEChERs前處理技術(shù)被廣泛應(yīng)用于農(nóng)藥殘留檢測(cè)。采用了改進(jìn)的QuEChERs前處理技術(shù)、超聲波輔助、固相萃取凈化，并優(yōu)化了HPLC-MS/MS檢測(cè)方法，建立了一種能準(zhǔn)確、快速電話靈敏測(cè)定蔬菜中噻蟲嗪殘留的檢測(cè)方法，滿足蔬菜相關(guān)限量標(biāo)準(zhǔn)的要求，為我國監(jiān)控蔬菜中噻蟲嗪農(nóng)藥殘留提供技術(shù)支撐[12-15]。
1 材料與方法
1.1材料
1.1.1儀器與設(shè)備
高效液相色譜儀，ACCELA 600 Pump：Thermo Fisher;質(zhì)譜系統(tǒng)，Thermo TSQ QUANTUM ACCESSMAX: Thermo Fisher;空氣浴振蕩器，QZX—C：哈爾濱市東明醫(yī)療儀器廠；電子分析天平( 0.000 1 g)，AL104:梅特勒-托利多儀器有限公司。
1.1.2試劑和材料
乙腈（分析純，北京化工廠），甲醇（色譜純，德國Merk公司）；噻蟲嗪農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液(100ug/m L，國家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心)；石墨化炭黑( Carb)、N-丙基乙二胺(PSA)(Agela Technologies公司)。
1.2試驗(yàn)方法
1.2.1樣品的提取
稱取蔬菜樣品5.0 g于50 mL塑料離心管中，加入20 mL乙腈，5 g NaCl，渦旋振蕩20 min．以4 000 r／min離心15 min，取上清液于另一只裝有7 g無水硫酸鈉的離心管內(nèi)，渦旋震蕩1 min，以4 000 r/min離心15min，待凈化。
1.2.2提取液的凈化
向2 mL離心管內(nèi)加入Card和PSA粉末分別為20 mg和60 mg，取樣品上清液1.6 mL于離心管內(nèi)，3 000r/min渦旋2 min，振蕩0.5 h后，以10 000 r/min離心5 min，取上清液過0.22um微孔濾膜，待測(cè)。
1.2.3色譜條件
色譜柱：Thermo C18色譜柱(100 mm×2.1 mm，1.9 um)；柱溫：室溫；流速：350 uL/min；進(jìn)樣量：1uL。梯度洗脫條件如表1所示。
離子源：電噴霧離子源ESI；掃描方式：正離子源；毛細(xì)管電壓：350 V；錐孔電壓：3 200 V；離子源溫度：200℃；蒸發(fā)溫度：200 0C；鞘氣：50 psi；輔助氣：10 arb。檢測(cè)方式：多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)(SRM)如表2所示。
1.2.4色譜分析
采用自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣，將噻蟲嗪農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品和凈化過的樣品注入LC/MS/MS中，在相同的色譜條件下，以保留時(shí)間定性，以樣品峰面積和標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比較定量。噻蟲嗪農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖見圖1。
2結(jié)果與討論
2.1提取條件的選擇
根據(jù)噻蟲嗪農(nóng)藥的極性和相關(guān)文獻(xiàn)的報(bào)道，用的較多的提取溶劑有乙酸乙酯、丙酮、乙腈等或者它們的混合溶劑。由于噻蟲嗪極性較強(qiáng)且蔬菜中含水量較多，故乙酸乙酯提取雜質(zhì)較多，提取溶液顏色較深，質(zhì)譜的基質(zhì)影響較大，回收率的精密度稍差，平均添加回收率為40.4%~65.2%；丙酮對(duì)于極性較強(qiáng)的農(nóng)藥提前效果較好，平均回收率為81.2%，但不易于水分層，且色素含量較高。乙腈具有溶解性大、穿透力強(qiáng)，凈化簡(jiǎn)單的特點(diǎn)，可以有效地提取農(nóng)藥且干擾物少，當(dāng)向提取液中加入氯化鈉時(shí)，乙腈與水有明顯分層，提取效果良好，且雜質(zhì)干擾較少，其平均回收率在94.5%，因此試驗(yàn)選擇乙腈作為提取溶劑[4-5]。原始的QuEChERS法去除雜質(zhì)雖然快速、簡(jiǎn)單、高效、安全，特別在操作步驟少、對(duì)于復(fù)雜樣品凈化上表現(xiàn)突
出，但加入無水硫酸鎂后極易結(jié)塊，除水效果不佳，導(dǎo)致樣品平行性較差，因此作者改進(jìn)為加入NaCl鹽析、離心分層取出上清液后，再加入無水硫酸鈉，使其干燥效果提高。
2.2柱凈化條件的選擇
由于蔬菜基質(zhì)復(fù)雜包括綠葉菜、根莖菜等，對(duì)于LC/M S/MS來說，上述提取液不能滿足檢測(cè)要求，需進(jìn)一步凈化。通過比較中性氧化鋁、Florisil固相萃取柱、Carb/NH2固相萃取柱進(jìn)行凈化和回收率試驗(yàn)，由于樣品在濃縮過程中經(jīng)常爆沸使得回收率在70.1%～82.5%；原始的QuEChERS法僅使用PSA凈化，雖然其去除有機(jī)酸效果較好，但去除色素、甾醇和
維生素效果一般，由于樣品含有部分色素，對(duì)LC/MS／MS產(chǎn)生較嚴(yán)重的基質(zhì)效應(yīng)，而Carb對(duì)色素雜質(zhì)等效果較好，故試驗(yàn)選用Carb+PSA粉末進(jìn)行樣品凈化。凈化吸附劑的用量是影響凈化效果和回收率的決定因素，使用量小時(shí)，凈化效果不明顯，有雜質(zhì)干擾，使用量大時(shí)凈化效果明顯但影響回收率。往同一濃度的噻蟲嗪標(biāo)準(zhǔn)品溶液中單用PSA和分別加入相同量的PSA與不同量Carb，經(jīng)渦旋震蕩1 min，靜置1 min，取上清液過0.22I_Lm有機(jī)濾膜，LC-MS/MS測(cè)定，每組6個(gè)平行樣，得到回收率數(shù)據(jù)為PSA分別加入50，60，70以及80 mg，回收率為92.3%—97.4%，故PSA對(duì)噻蟲嗪吸附?jīng)]有影響，故選擇60 mg PSA。當(dāng)加入60 mg PSA以及分別加入20，30，40和50 mg Carb時(shí)，回收率分別為84.5 %，94.7%，70.2%以及67.6%。Carb對(duì)色素等雜質(zhì)凈化效果好，但對(duì)噻蟲嗪有較強(qiáng)的吸附作用，PSA對(duì)噻蟲嗪吸附影響較小。通過試驗(yàn)數(shù)據(jù)確定了凈化蔬菜樣品的乙腈提取液，PSA用量為60 mg，Carb用量為20 mg。
2.3線性與檢出限
將100.0 ug/mL的噻蟲嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液用乙腈：水=2：8（V:V稀釋配得50.0，10.0，5.0，1.0和0.5 ng/mL系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在上述液相條件下進(jìn)行測(cè)定，以噻蟲嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與面積作標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)樣線性方程為：Y=86 778X+36 892，相關(guān)系數(shù)為：R=0.999 9；其中y為噻蟲嗪峰面積，X為標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度。
2.4回收率和精密度
選用番茄、甘藍(lán)、芹菜3種蔬菜樣品若干份（已測(cè)得此樣的噻蟲嗪農(nóng)藥殘留本底值為空白），分別加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，3個(gè)添加水平分別為0.01，0.05和0.10 mg/kg，每個(gè)添加水平做6個(gè)平行，充分混勻后按“2.2”項(xiàng)操作進(jìn)行測(cè)定，求平均回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差( RSD)。具體數(shù)據(jù)見表3所示，樣品空白及加標(biāo)樣品譜圖見圖2和圖3。
3結(jié)論
試驗(yàn)建立了一種快速檢測(cè)蔬菜中噻蟲嗪農(nóng)藥殘留的LC/MS／MS的檢測(cè)技術(shù)，該方法回收率在89.9%~102.4%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.88%~3.75%之間，方法檢出限為0.3u g/kg定量限為1ug/kg，具有靈敏度高、分離效果好、重復(fù)性強(qiáng)等特點(diǎn)，適用于短時(shí)間內(nèi)大批量測(cè)定蔬菜中噻蟲嗪。
4摘要
利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC/MS/MS)建立了蔬菜中噻蟲嗪農(nóng)藥測(cè)定的方法。方法試樣中噻蟲嗪農(nóng)藥殘留在超聲波振蕩條件下用乙腈提取，經(jīng)石墨化炭黑(Carb)和N-丙基乙二胺(PSA)粉末凈化，經(jīng)液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀檢。噻蟲嗪農(nóng)藥殘留的色譜圖分離效果良好，在0.5~50.0 ng/mL質(zhì)量濃度內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系, R=0.999 9，方法的檢出限為0.3 ug/kg，回收率為89.9%~102.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.8%~3.75%。該方法簡(jiǎn)單、快速、靈敏、凈化效果好、回收率高，適合蔬菜中噻蟲嗪農(nóng)藥殘留的檢測(cè)和安全監(jiān)控。
