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論文摘要：為了正確使用銀杏種間資源，利用堿提法分別對(duì)雌雄銀杏葉（各十份）總黃酮的進(jìn)行比較；為了篩選雄性銀杏葉最佳堿提法提取工藝，利用正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，考察了提取時(shí)間、PH、提取溫度、液料比四個(gè)因素對(duì)雄性銀杏葉總黃酮堿提法工藝的影響，并用分光光度法測(cè)定總黃酮的含量。
論文關(guān)鍵詞：雌雄銀杏葉,總黃酮,正交試驗(yàn),提取工藝
　　銀杏為雌雄異株，中國(guó)是銀杏的原產(chǎn)地，在長(zhǎng)期的演化過(guò)程中形成了豐富的雄株種質(zhì)資源，因此進(jìn)行銀杏雄株和雌株葉片總黃酮含量分析,對(duì)合理利用銀杏種間資源意義重大。銀杏葉中黃酮類化合物的提取率直接決定銀杏葉的藥用價(jià)值，本文以銀杏總黃酮的提取率為指標(biāo)對(duì)銀杏葉提取物的提取和精制工藝進(jìn)行研究,比較雌雄銀杏葉總黃酮含量，和銀杏葉總黃酮提取體系優(yōu)化。本文采用堿提法提取銀杏葉總黃酮。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：雄性銀杏葉總黃酮含量總體上大于雌性銀杏葉總黃酮的含量；雄性銀杏葉總黃酮堿提法的最佳提取工藝條件為：提取時(shí)間2.5h,PH=11,提取溫度70℃，液料比1:15。結(jié)論：堿提法提取葉總黃酮工藝簡(jiǎn)單穩(wěn)定、成本較醇提法低，方法合理可行，可以運(yùn)用大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
　　1實(shí)驗(yàn)過(guò)程
　　1.1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)母液的制備
　　精確稱取干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品20mg，用60%乙醇溶解并定容至10ml容量瓶，搖勻，搖勻既得2mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)母液。
　　1.2蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
　　精密吸取對(duì)照溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL分別置于編號(hào)1、2、3、4、5、6、7號(hào)的10mL具塞刻度試管中,先加5%亞硝酸鈉溶液0.3mL,搖勻,放置6min,再加10%硝酸鋁溶液0.3mL,搖勻,再放置5min,加4%氫氧化鈉溶液4mL,各加60%乙醇定容至10mL,放置15min,在波長(zhǎng)510nm處測(cè)定各試管中溶液的吸光度。以濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),得回歸方程:y=1.7615x+0.0103,R=0.9985.線性關(guān)系良好。
　　1.1.3雌雄銀杏葉總黃酮的提取
　　分別稱取雌雄銀杏葉十份，每份1g，分別編號(hào)1-10.用PH=10的NaOH浸出，液料比為1:20，在50℃的條件下提取2小時(shí)。浸出液經(jīng)離心后，用30%乙醇定容至10mL。
　　1.1.4雄性銀杏葉總黃酮的優(yōu)化體系篩選
　　對(duì)雄性銀杏葉總黃酮的優(yōu)化體系篩選采用4因素3水平的正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，對(duì)提取時(shí)間、提取溫度、PH、液料比進(jìn)行了篩選。正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)詳見(jiàn)表1。
　　表1正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)
　　

處理	提取時(shí)間	PH	溫度	液料比
1	1	1	1	1
2	1	2	2	2
3	1	3	3	3
4	2	1	2	3
5	2	2	3	1
6	2	3	1	2
7	3	1	2	3
8	3	2	3	1
9	3	3	1	2

1.1.5雌雄銀杏葉總黃酮的測(cè)量
　　按上述操作方法對(duì)雌雄銀杏葉總黃酮提取液在分光光度計(jì)下測(cè)定。
　　提取率=(c×d×v)/m×100%.
　　式中:c為樣品的黃酮濃度mg/mL；v為樣品溶液的體積/mL；d為樣品的總稀釋倍數(shù),m為樣品的質(zhì)量/mg�？傸S酮含量(%)=供試品吸光度×標(biāo)準(zhǔn)品相當(dāng)蘆丁量/標(biāo)準(zhǔn)品吸光度×供試品量
　　2實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析
　　2.1雌雄銀杏葉總黃酮比較
　　在同一堿提取條件下，分別對(duì)雌雄銀杏葉總黃酮提取液（各十份）含量（參照蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線）進(jìn)行了比較，結(jié)果詳見(jiàn)表2.
　　表2雌雄銀杏葉總黃酮含量比較
　　

編號(hào)		1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
雄性	吸光度	0.198	0.197	0.194	0.196	0.194	0.196	0.195	0.193	0.197	0.195
	濃度（mg/mL）	0.338	0.336	0.331	0.335	0.331	0.335	0.333	0.330	0.336	0.333
	含量（%）	3.38	3.36	3.31	3.35	3.31	3.35	3.33	3.30	3.36	3.33
雌性	吸光度	0.192	0.189	0.190	0.188	0.190	0.187	0.188	0.187	0.191	0.189
	濃度（mg/mL）	0.328	0.323	0.324	0.321	0.324	0.319	0.321	0.319	0.326	0.323
	含量（%）	3.28	3.23	3.24	3.21	3.24	3.19	3.21	3.19	3.26	3.23

通過(guò)表2可以看出，雄性銀杏葉總黃酮的最小含量3.30mg/mL比雌性銀杏葉總黃酮的最大含量3.28mg/mL大，所以，雄性銀杏葉的總黃酮含量總體上大于雌性銀杏葉總黃酮含量。
　　2.2雄性銀杏葉總黃酮優(yōu)化體系篩選
　　按照正交試驗(yàn)方案對(duì)總黃酮提取條件進(jìn)行了研究，結(jié)果見(jiàn)表3。
　　表3雄性銀杏葉總黃酮反應(yīng)體系正交優(yōu)化
　　

處理	提取時(shí)間（h）	PH	溫度(℃)	液料比	吸光度	濃度（mg/mL）	產(chǎn)率（%）
1	1	1	1	1	0.179	0.305	3.05
2	1	2	2	2	0.175	0.298	2.98
3	1	3	3	3	0.168	0.286	2.86
4	2	1	2	3	0.172	0.293	2.93
5	2	2	3	1	0.201	0.344	3.44
6	2	3	1	2	0.189	0.323	3.23
7	3	1	2	3	0.187	0.319	3.19
8	3	2	3	1	0.209	0.358	3.58
9	3	3	1	2	0.199	0.340	3.40
K1	8.89	9.17	9.68	10.07
K2	9.66	10.0	9.10	9.61
K3	10.17	9.49	9.88	9.19
R	1.28	0.83	0.78	0.88
最佳反應(yīng)體系		提取時(shí)間2.5h,PH=11,提取溫度70℃，液料比1:15

　　K1、K2、K3表示各個(gè)因素分別取3個(gè)水平時(shí)相應(yīng)的試驗(yàn)結(jié)果之和；（本表以產(chǎn)率為對(duì)照），R是K1、K2、K3中最大值與最小值之差，它反映了試驗(yàn)中各因素影響的大小。它們的大小順序反映出相關(guān)因素分別取三個(gè)水平時(shí)提取率的高低。由表3可看出，各因素對(duì)銀杏葉總黃酮提取的影響大小順序?yàn)椋禾崛�時(shí)間>液料比>PH>提取溫度。
　　2.3正交試驗(yàn)驗(yàn)證
　　根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果最終確定的提取方案進(jìn)行重復(fù)8次試驗(yàn)，每次稱取銀杏葉1.0g提取時(shí)間2.5h，PH=11，提取溫度70℃，液料比1:15，按上述測(cè)定法測(cè)定總黃酮含量。
　　表4最佳反應(yīng)體系檢驗(yàn)
　　

檢驗(yàn)	1	2	3	4	5	6	7	8	平均
濃度mg/ml	0.347	0.339	0.354	0.336	0.350	0.352	0.349	0.339	0.345

上表表明堿提法工藝提取的銀杏葉總黃酮含量較高并且穩(wěn)定，該工藝穩(wěn)定可行。
　　3結(jié)論
　　本實(shí)驗(yàn)研究對(duì)銀杏葉總黃酮的成本低，且提取率葉較高，適合于大規(guī)模生產(chǎn)。雄性銀杏葉總黃酮的最佳反應(yīng)體系為提取時(shí)間2.5h，PH=11，提取溫度70℃，液料比1:15。并且得出雄性銀杏葉總黃酮的含量總體上大于雌性銀杏葉總黃酮的含量。在實(shí)際對(duì)銀杏資源的利用上可以適當(dāng)加大對(duì)雄性銀杏的利用。
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