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　鼻咽癌是我國南方及東南亞地區(qū)最常見的惡性腫瘤，其發(fā)生發(fā)展是一個(gè)涉及多基因、多途徑和多階段的復(fù)雜生物學(xué)過程[1]。纖維連接蛋白（FN）是基底膜及細(xì)胞外基質(zhì)主要的糖蛋白成分，在腫瘤細(xì)胞的浸潤及轉(zhuǎn)移中具有重要作用�；�質(zhì)金屬蛋白酶14（MMP14）是鋅依賴性基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）家族的一員，可降解細(xì)胞外基質(zhì)及基底膜，MMP14的高表達(dá)在腫瘤進(jìn)展及浸潤轉(zhuǎn)移中同樣具有重要的作用[2]。本實(shí)驗(yàn)通過研究鼻咽癌和鼻咽炎性組織中MMP14和FN的表達(dá)情況及其與鼻咽癌臨床預(yù)后的相關(guān)性，探討它們在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移中的意義。1材料與方法1.1材料 本實(shí)驗(yàn)所用標(biāo)本均經(jīng)鼻咽部活檢病理確診，鼻咽癌標(biāo)本56例，鼻咽炎標(biāo)本18例，所有標(biāo)本均為病理科包埋好的石蠟切片。在56例鼻咽癌標(biāo)本中，男41例，女15例；年齡20～76歲，其中≥50歲33例，<50歲23例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例；臨床分期在Ⅰ～Ⅱ期的22例，Ⅲ～Ⅳ期的34例。所有標(biāo)本均取自廣西柳州市工人醫(yī)院2012年5月至2014年8月的就診患者。　　1.2試劑及方法所有標(biāo)本均經(jīng)中性福爾馬林固定，乙醇脫水及石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，免疫組織化學(xué)技術(shù)采用SP法，按SP試劑盒說明書進(jìn)行操作。多克隆兔抗人FN抗體、單克隆鼠抗人MMP14抗體及SP試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。
　　1.3結(jié)果判斷在光學(xué)顯微鏡下對兩組免疫組化片染色情況進(jìn)行評估，F(xiàn)N抗體表達(dá)判斷標(biāo)準(zhǔn)如下：根據(jù)著色的表達(dá)形態(tài)評分，完全缺失計(jì)0分，碎片狀或顆粒狀計(jì)1分，斷續(xù)線狀或條索狀計(jì)2分，連續(xù)線狀或偶有中斷計(jì)3分。根據(jù)陽性細(xì)胞所占百分比計(jì)分，陽性細(xì)胞率<10%為0，10%～40%為1分，41%～70%為2分，>70%為3分，按著色形態(tài)和陽性細(xì)胞所占百分比兩項(xiàng)得分相乘劃分為兩組：弱表達(dá)或陰性為0～4分，陽性表達(dá)為6～9分。MMP14抗體的表達(dá)根據(jù)著色的強(qiáng)弱程度評分，不著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分；根據(jù)陽性細(xì)胞所占百分比計(jì)分，陽性細(xì)胞率<10%為0，10%～40%為1分，41%～70%為2分，>70%為3分，按著色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞所占百分比兩項(xiàng)得分相乘劃分為兩組：弱表達(dá)或陰性為0～4分，陽性表達(dá)為6～9分。
　　1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，應(yīng)用χ2檢驗(yàn)分析FN、MMP14在鼻咽癌組織和鼻咽炎性組織中的表達(dá)情況及其與患者臨床病理特征之間的關(guān)系；應(yīng)用Spearman等級相關(guān)分析FN與MMP14表達(dá)之間的相關(guān)性，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2結(jié)果2.1鼻咽癌組織和鼻咽炎性組織中FN和MMP14的表達(dá)FN主要分布在各種基底膜及間質(zhì)，根據(jù)其表達(dá)部位分為間質(zhì)FN和基底膜FN，F(xiàn)N在正常鼻咽黏膜上皮基底膜及間質(zhì)纖維結(jié)締組織中，陽性表達(dá)呈纖維狀或連續(xù)線狀分布（見圖1A）。FN在鼻咽癌的表達(dá)主要為斷續(xù)或條索狀，或呈碎片狀及顆粒狀，甚至完全消失（見圖1B）。間質(zhì)FN在鼻咽癌組及鼻咽炎組的陽性表達(dá)率分別為73.21%及44.44%，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；基底膜FN在鼻咽癌組及鼻咽炎組的陽性表達(dá)率分別為32.14%及83.33%，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。MMP14主要表達(dá)于鼻咽癌細(xì)胞或癌旁間質(zhì)，陽性細(xì)胞在靠近癌細(xì)胞巢邊緣及浸潤性生長區(qū)域較多，且染色較深（見圖2）；MMP14在鼻咽癌組及鼻咽炎組的陽性表達(dá)率分別為82.14%及22.22%，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見表1。
　　圖1FN在不同鼻咽黏膜的表達(dá)情況（SP：×40）。A：在正常鼻咽黏膜上皮
　　基底膜及間質(zhì)纖維結(jié)締組織中的表達(dá)；B：在鼻咽癌組織中的表達(dá)。
　　圖2MMP14在鼻咽癌組織中的表達(dá)（SP：×40）。
　　表1 FN及MMP14在鼻咽癌及鼻咽炎組織中的表達(dá)[n（%）]
　　組別n間質(zhì)FN弱表達(dá)/陰性陽性基底膜FN弱表達(dá)/陰性陽性MMP14弱表達(dá)/陰性陽性鼻咽癌組5615（26.79）41（73.21）38（67.86）18（32.14）10（17.86）46（82.14）鼻咽炎組1810（55.56）8（44.44）3（16.67）15（83.33）14（77.78）4（22.22）χ2-5.040014.446822.3184P-0.02480.00000.0000
　　2.2基底膜FN及MMP14在鼻咽癌組織中的表達(dá)與鼻咽癌臨床病理特征的關(guān)系基底膜FN及MMP14蛋白的表達(dá)與鼻咽癌的性別、年齡無顯著性相關(guān)（P>0.05），與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期顯著相關(guān)（P<0.01），在淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移及臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期的鼻咽癌組織中，基底膜FN的表達(dá)高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期的鼻咽癌組織，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。而MMP14在淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移及臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期的鼻咽癌組織中的表達(dá)低于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期的鼻咽癌組織，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見表2。
　　表2 基底膜 本文由WwW. zgazxxw.com提供，畢業(yè)論文 網(wǎng)專業(yè)代寫教育教學(xué)論文和畢業(yè)論文以及發(fā)表論文服務(wù)，歡迎光臨zgazxxw.comFN及MMP14的表達(dá)與鼻咽癌不同臨床病理特征的關(guān)系
　　觀察指標(biāo)因素n基底膜FN弱表達(dá)/
　　陰性陽性χ2PMMP14弱表達(dá)/
　　陰性陽性χ2P性別男4128130.04310.83558330.01980.8881女15105213年齡≥50歲3323100.12470.72406270.07760.7805<50歲23158419臨床分期Ⅰ～Ⅱ期2271521.57730.000091310.66620.0011Ⅲ～Ⅳ期34313133淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無2161523.77540.000091211.71940.0006有35323134
　　2.3基底膜FN與MMP14在鼻咽癌及鼻咽炎組織中的表達(dá)及兩者的相關(guān)性鼻咽癌組織MMP14陽性表達(dá)的46例中，基底膜FN陽性表達(dá)的有10例；MMP14弱表達(dá)或陰性表達(dá)的10例中，基底膜FN弱表達(dá)或陰性表達(dá)的有2例；鼻咽炎組織MMP14陽性表達(dá)的4例中，基底膜FN亦陽性表達(dá)的有2例；MMP14弱表達(dá)或陰性表達(dá)的14例中，基底膜FN亦陰性表達(dá)的有1例。見表3。經(jīng)Spearman等級相關(guān)分析，基底膜FN及MMP14在鼻咽癌組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.478，P=0.000）。
　　表3 基底膜FN與MMP14在鼻咽癌及鼻咽炎組織中的表達(dá)及兩者的相關(guān)性
　　組別觀察指標(biāo)表達(dá)情況MMP14陽性弱表達(dá)陰性鼻咽癌組基底膜FN陽性108弱表達(dá)/陰性362鼻咽炎組基底膜FN陽性21 本文由WwW. zgazxxw.com提供，畢業(yè)論文 網(wǎng)專業(yè)代寫教育教學(xué)論文和畢業(yè)論文以及發(fā)表論文服務(wù)，歡迎光臨zgazxxw.com3弱表達(dá)/陰性21
　　3討論鼻咽癌是我國常見的頭頸部腫瘤，其發(fā)生發(fā)展過程十分復(fù)雜，是多因素共同作用的結(jié)果。 FN是一種糖蛋白，在血漿中以可溶性二聚體形式存在，在細(xì)胞表面和細(xì)胞外基質(zhì)中以二聚體或多聚體形式存在

　　 。FN可與膠原蛋白、纖維蛋白、肝素和肌動(dòng)蛋白等結(jié)合，參與細(xì)胞黏附、運(yùn)動(dòng)、調(diào)理作用，促進(jìn)傷口愈合，并維持細(xì)胞形狀等生物學(xué)過程。MMP14是一種模型基質(zhì)金屬蛋白酶，可激活MMP2間接降解細(xì)胞外基質(zhì)，也可通過降解膠原蛋白、纖連蛋白、層粘連蛋白、纖維蛋白、玻璃粘連蛋白等直接降解細(xì)胞外基質(zhì)及基底膜，從而在細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、分化、血管生成和宿主免疫逃避過程中發(fā)揮重要作用�！【植拷�潤與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是鼻咽癌最主要的死亡原因之一，降解細(xì)胞外基質(zhì)突破基底膜是腫瘤細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移的重要環(huán)節(jié)。FN作為基底膜的重要組成成分，對維持細(xì)胞的穩(wěn)定性具有重要作用。有文獻(xiàn)報(bào)道[3～5]，F(xiàn)N表達(dá)與鼻咽癌、結(jié)腸癌及人纖維肉瘤的轉(zhuǎn)移相關(guān)，與惡性甲狀腺腫瘤、惡性周圍神經(jīng)鞘瘤的惡性程度有關(guān)。另有文獻(xiàn)證實(shí)[6]，F(xiàn)N蛋白能與Caspase3結(jié)合，促進(jìn)骨肉瘤細(xì)胞的凋亡反應(yīng)。而MMP14能降解細(xì)胞外基質(zhì)及基底膜，在腫瘤細(xì)胞的浸潤與轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)[7～13]，MMP14在乳腺癌、前列腺癌、肝癌、胃癌、頭頸部腫瘤及宮頸癌等惡性腫瘤中高表達(dá)，并與腫瘤的惡性程度、遷移侵襲呈正相關(guān)。且在胃癌中，MMP14可以激活非經(jīng)典Wnt通路中Wnt5a的表達(dá)，使腫瘤細(xì)胞向上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，促進(jìn)腫瘤的遷移侵襲[14]。此外，MMP14高表達(dá)與彌漫性浸潤型星形細(xì)胞瘤的進(jìn)展相關(guān)[15]。
　　本實(shí)驗(yàn)中我們通過免疫組織化學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)，基底膜FN在鼻咽癌組織中的表達(dá)低于鼻咽炎組織，呈斷續(xù)或條索狀，或碎片狀及顆粒狀，甚至完全消失，而MMP14在鼻咽癌組織中的表達(dá)明顯高于鼻咽炎組織，且兩者在鼻咽癌組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。基底膜FN和MMP14在鼻咽癌組織中的表達(dá)與年齡、性別無明顯相關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期顯著相關(guān)，在淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移及臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期的鼻咽癌組織中，基底膜FN的表達(dá)高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期的鼻咽癌組織，而MMP14在淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移及臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期的 本文由WwW. zgazxxw.com提供，畢業(yè)論文 網(wǎng)專業(yè)代寫教育教學(xué)論文和畢業(yè)論文以及發(fā)表論文服務(wù)，歡迎光臨zgazxxw.com鼻咽癌組織中的表達(dá)低于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期的鼻咽癌組織，證實(shí)了MMP14在鼻咽癌中高表達(dá)，且與鼻咽癌的局部浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，推測高表達(dá)的MMP14可能通過降解基底膜FN，使基底膜FN的表達(dá)下降，從而破壞腫瘤細(xì)胞的穩(wěn)定性，使腫瘤細(xì)胞黏附性下降，易于脫落，為腫瘤細(xì)胞在其他部位及遠(yuǎn)處的生長創(chuàng)造了有利條件，對鼻咽癌的浸潤與轉(zhuǎn)移具有促進(jìn)作用。
　　本實(shí)驗(yàn)中基底膜FN在鼻咽癌組織中的表達(dá)低于鼻咽炎組織，呈斷續(xù)或條索狀，或碎片狀及顆粒狀，甚至完全消失，而間質(zhì)FN在鼻咽癌組織中的表達(dá)高于鼻咽炎組織，推測基底膜FN及間質(zhì)FN可能在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展中具有不同作用。間質(zhì)FN在鼻咽癌組織中表達(dá)增加的機(jī)制尚不清楚，可能是通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長運(yùn)動(dòng)，抑或是機(jī)體的一種反應(yīng)，但有研究表明間質(zhì)FN的增多與腫瘤的惡性程度相關(guān)，是預(yù)后不良的因素之一[16]。本實(shí)驗(yàn)同樣證明了這一觀點(diǎn)。
　　綜上所述，F(xiàn)N及MMP14在鼻咽癌發(fā)生、發(fā)展及浸潤與轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。因而FN及MMP14的表達(dá)改變可作為判斷鼻咽癌預(yù)后的標(biāo)志物之一，且為MMP14作為鼻咽癌晚期治療的靶向標(biāo)志物提供了理論依據(jù)。參考文獻(xiàn)[1] Chang ET，Adami HO.The enigmatic epidemiology of nasopharyngeal carcinoma [J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2006，15（10）：17651777.
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