不同品種油橄欖葉中多酚含量對比
相關(guān)鏈接： 中國安全網(wǎng) 中國質(zhì)量網(wǎng) 中國論文網(wǎng) 中國資訊網(wǎng)
朱靜平
西昌學(xué)院輕化工程學(xué)院（西昌615013）
摘要通過單因素試驗(yàn)，再采用正交設(shè)計(jì)優(yōu)選油橄欖葉片中多酚的提取工藝后。對5個(gè)油橄欖品種葉片中多酚含量進(jìn)行測定對比。結(jié)果表明：最佳提取工藝為乙醇體積分?jǐn)?shù)70%、提取料液比1：30 (g/m L)、提取時(shí)間1.5 h、提取溫度70℃。不同品種油橄欖葉片中多酚含量不同，卡林、科拉蒂、萊星、佛奧和配多靈5個(gè)品種中，配多靈含量最大，萊星含量最小。通過對比不同品種油橄欖葉片多酚含量的大小，為油橄欖葉片中多酚的生產(chǎn)和應(yīng)用提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)，使油橄欖葉的開發(fā)具有更大的前景。
關(guān)鍵詞正交設(shè)計(jì)；油橄欖葉；植物多酚；提取工藝；含量測定
油橄欖為木犀科木樨欖屬植物，常綠闊葉喬木，又名洋橄欖、齊敦果。栽培品種有較高食用價(jià)值，含豐富優(yōu)質(zhì)食用植物油——油橄欖油。
根據(jù)前有工作得知，油橄欖葉中活性成份主要有：有機(jī)酸、多酚、蛋白質(zhì)、氨基酸等�，F(xiàn)今將油橄欖葉片用于食品工業(yè)中，得到橄欖葉片茶，說明其利用價(jià)值較大。從油橄欖葉片中提取多酚類化合物具有重要的意義。油橄欖品種繁多，不同品種油橄欖葉片中所含的活性成分相同，但是其含量是否一致在目前國內(nèi)外研究中鮮見報(bào)道。因此，有必要對不同品種油橄欖葉中多酚含量進(jìn)行探討，以期對油橄欖葉片中多酚的生產(chǎn)和應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
試驗(yàn)擬對油橄欖葉片中的多酚進(jìn)行提取，采用單因素、正交試驗(yàn)優(yōu)選出最佳提取工藝后。在最佳提取工藝條件下對5個(gè)品種油橄欖葉中的多酚進(jìn)行測定，以期為油橄欖葉片的利用提供數(shù)據(jù)依據(jù)。
1材料與方法
1.1試驗(yàn)儀器、設(shè)備與材料
FW-400A傾斜式高速萬能粉碎機(jī)：北京中興偉業(yè)儀器有限公司；HZK-FA210電子分析天平：福州華志科學(xué)儀器有限公司；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋：金壇市杰瑞爾電器有限公司；TU-1901雙光束紫外可見分光光度計(jì)：北京普析通用儀器有限責(zé)任公司：SHZ-D（Ⅲ循環(huán)水式真空泵）：坦洲市博奧真空設(shè)備有限公司；電子天平ETTLERAE240：瑞士METTLER公司。
油橄欖葉片：由涼山州國家油橄欖良種基地提供，品種分別為卡林、科拉蒂、佛奧、配多靈和萊星；福林酚試劑( AR)、焦性沒食子酸(AR)、碳酸鈉( AR)：成都市科龍化工試劑廠。試驗(yàn)用體積分?jǐn)?shù)為95%乙醇工業(yè)酒精按一定的比例配制。
1.2試驗(yàn)方法
將采摘的油橄欖葉片用蒸餾水洗凈后置于實(shí)驗(yàn)室自然陰干，干燥后的油橄欖葉片于微型高速粉碎機(jī)粉碎，放在干燥器皿中備用。
1.2.1單因素試驗(yàn)
稱取2g干燥的葉片粉末，置于250 m L圓底燒瓶中，在不同條件下進(jìn)行提取，確定各因素較佳值。每次提取液過濾，定容至250 m L，測定提取液中多酚的含量（試驗(yàn)采用萊星作單因素試驗(yàn)）。
1.2.2正交試驗(yàn)
以乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、提取溫度和提取時(shí)間作為考察因素，采用正交試驗(yàn)Lg(34)對樣品中的多酚進(jìn)行提取，以多酚含量作為指標(biāo)，進(jìn)行試驗(yàn)優(yōu)化，確定出最佳提取工藝條件（試驗(yàn)采用萊星作正交試驗(yàn)）。
1.3多酚的測定
1.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
配制濃度分別為0，0.05，0.10，0.15, 0.20,0.25，0.35和0.50 mg/m L的焦性沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)使用液，從各標(biāo)準(zhǔn)使用液中精確移取1.0 m L，分別置于100 m L容量瓶中，加入2.5 m L的福林酚試劑，60 m L純水搖勻，再分別加入7.5 m L 20%的Na2CO3溶液，純水定容得到濃度為0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.5和5.0 μg/m L的標(biāo)準(zhǔn)系列，搖勻放置30 min后，在765 nm處測定吸光度，結(jié)果見圖1。所得線性回歸方程為y=0.154 7x+0.007 0，R2=0.999 5。
1.3.2不同品種多酚含量的測定
不同品種油橄欖葉片按最佳提取工藝條件提取后，移取各樣品溶液1.0 m L，分別置于100 m L容量瓶中，各加入2.5 m L的福林酚試劑，60 m L蒸餾水搖勻，再加入7.5 m L, 20%的Na2CO3溶液，用蒸餾水溶液定容，搖勻放置30 min后，分別在765 nm下測定吸光度。
2結(jié)果與分析
2.1單因素試驗(yàn)
2.1.1 乙醇體積分?jǐn)?shù)對多酚含量的影響
稱取2g葉片粉末，分別以體積分?jǐn)?shù)為30%,40%，50%，60%，70%，80%和90%的乙醇溶液為溶劑，在提取料液比為1：30(g/m L)，提取溫度為50℃的條件下，水浴加熱回流2h，真空抽濾，用蒸餾水定容至250 m L，取上層清液1.0 m L，按照1.3.2的方法測定吸光度，計(jì)算多酚的含量，結(jié)果見圖2。
從圖2可以得知，多酚的含量在濃度30%～90%范圍內(nèi)隨濃度的升高而增加，且在40%以后呈現(xiàn)急劇上升，乙醇體積分?jǐn)?shù)為80%時(shí)多酚的含量最大，應(yīng)選擇80%的乙醇作為提取溶劑。
2.1.2提取料液比對多酚含量的影響
用體積分?jǐn)?shù)為80%乙醇溶液，提取溫度為50℃，分別在料液比為1：10，1：20，1：30,1：40,1：50，1: 60和1：70(g/m L)的條件下水浴加熱回流2h，測定多酚的含量，結(jié)果見圖3。
從圖3可以得知，隨著提取料液比的增大多酚的含量增加，在1：30(g/m L)時(shí)達(dá)到最大值，而在1：30(g/m L)后呈現(xiàn)降低趨勢。因此確定1：30(g／m L)為最佳料液比。
2.1.3提取時(shí)間對多酚含量的影響
用體積分?jǐn)?shù)為80%乙醇溶液，在提取料液比為1：30(g/m L)、溫度為50℃下，分別在時(shí)間為0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0和3.5 h下提取后得到多酚的含量，結(jié)果見圖4。
從圖4可以得知，隨著提取時(shí)間的增加，多酚的含量慢慢增加，增加到一定高度后有下降，下降后又趨于平緩。在2h時(shí)達(dá)到最大值，2h之后呈現(xiàn)下降趨勢。所以選擇2h為最佳提取時(shí)間。
2.1.4提取溫度對多酚含量的影響
用體積分?jǐn)?shù)為80%乙醇，料液比為1：30(g／m L)，時(shí)間為2h下分別在20℃，30℃ ，40 ℃, 50℃，60℃ ，70 ℃和80℃的條件下提取后得到多酚的含量，結(jié)果見圖5。
由圖5可以得知，隨溫度的升高多酚的含量逐漸增加，當(dāng)提取溫度為60℃時(shí)多酚含量最大，60 ℃以后又逐漸降低。所以提取溫度范圍宜在60℃左右。
2.2正交試驗(yàn)
在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取料液比、提取時(shí)間和提取溫度作為考察因素，以測得的油橄欖葉中的多酚含量為考察指標(biāo)，選用L9(34)正交試驗(yàn)（表1）來確定最佳提取條件，根據(jù)表1進(jìn)行正交試驗(yàn)，得正交試驗(yàn)結(jié)果分析表（表2）。
從表2極差數(shù)據(jù)可知，乙醇體積分?jǐn)?shù)、料液比、提取時(shí)間和提取溫度對多酚含量的影響順序?yàn)镈BAC，即提取溫度對多酚的含量有較為顯著的影響，料液比和乙醇體積分?jǐn)?shù)次之，提取時(shí)間對多酚提取的影響最小。最佳提取條件是A1B2C1D3，即乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%，料液比為1：30( g/m L)，提取時(shí)間為1.5 h，提取溫度為70℃。
2.3不同品種油橄欖葉中多酚含量測定
在最佳提取條件：乙醇體積分?jǐn)?shù)為70%，料液比為1：30(g/m L)，提取時(shí)間為1.5 h，提取溫度為70℃。按1.3.2方法測定多酚含量。結(jié)果見表3。
由表3得知，不同品種葉片中多酚的含量由低到高依次為萊星、科拉蒂、佛奧、卡林、配多靈。
2.4加標(biāo)回收
各稱取2g樣品粉末，用體積分?jǐn)?shù)為70%乙醇溶液為溶劑，料液比1：30( g/m L)，然后在提取溫度70℃的條件下，水浴加熱回流提取1.5 h，真空抽濾，濾液用蒸餾水定容至250 m L，精密量取上述溶液1.0mL，置于6個(gè)100 m L容量瓶中，分別加2.5 m L的福林
酚試劑，60 m L蒸餾水搖勻，再分別加入7.5 m L, 200/。的Na2CO3溶液，其中3份各加入1.0 m L 1μg/m L的焦性沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)液，用純水定容，搖勻放置30 min后，在765 nm下測定吸光度，計(jì)算出加標(biāo)回收率見表4。
3結(jié)論
通過試驗(yàn)可以初步得出：最佳提取工藝條件為乙醇體積分?jǐn)?shù)70%，料液比1：30( g/m L)，提取時(shí)間1.5 h，提取溫度70 ℃。在最佳條件下對5個(gè)品種多酚含量進(jìn)行測定，結(jié)果表明不同品種多酚含量不同，但差別不大。其中配多靈最大，其次分別是卡林、佛奧、科拉蒂、萊星。加標(biāo)回收率在99.10%～102.5%之間，結(jié)果較可觀，方法簡單易懂，對油橄欖葉片的應(yīng)用提供了一定的理論數(shù)據(jù)依據(jù)。
